hDcp2 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-418511-LAC

DCP2 codifica a enzima humana de remoção do cap do mRNA, hDcp2, um componente central da degradação citoplasmática de mRNAs, que remove a estrutura de cap 5′ para iniciar a degradação no sentido 5′→3′. Por meio de sua função no complexo de decapping, com cofatores como DCP1 e ativadores de decapping, a hDcp2 contribui para o controle de qualidade de RNAs, a dinâmica dos corpos de processamento (P-bodies) e a remodelação do transcriptoma a jusante de respostas ao estresse e de alterações na expressão gênica dependentes de sinalização. A degradação regulada por DCP2 interage com vias que controlam a tradução, a vigilância de RNA e a adaptação celular a estímulos ambientais, tornando-a relevante para estudos de regulação pós-transcricional. Alterações no decapping de mRNA e a desregulação da estabilidade de RNA têm sido associadas a programas de expressão gênica ligados a doenças, sustentando a investigação de DCP2 em modelos de sinalização oncogênica, neurobiologia e interações hospedeiro–patógeno.

As Partículas de Ativação Lentivirais hDcp2 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de DCP2 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais hDcp2 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição DCP2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de hDcp2. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo DCP2 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.