Partículas Lentivirales de Activación (h) hDcp2: sc-418511-LAC

DCP2 codifica la enzima humana de descape de ARNm hDcp2, un componente central del recambio citoplasmático de ARNm que elimina la estructura de caperuza 5′ para iniciar la degradación 5′→3′. A través de su función en el complejo de descape junto con cofactores como DCP1 y activadores del descape, hDcp2 contribuye al control de calidad del ARN, a la dinámica de los cuerpos de procesamiento (P-bodies) y a la remodelación del transcriptoma tras respuestas al estrés y cambios en la expresión génica dependientes de señales. La degradación regulada por DCP2 se integra con vías que controlan la traducción, la vigilancia del ARN y la adaptación celular a señales del entorno, lo que la hace relevante para estudios de regulación posranscripcional. La alteración del descape del ARNm y la desregulación de la estabilidad del ARN se han vinculado a programas de expresión génica asociados a enfermedades, lo que respalda la investigación de DCP2 en modelos de señalización oncogénica, neurobiología e interacciones huésped–patógeno.

Las partículas de activación lentiviral hDcp2 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de DCP2 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral hDcp2 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción DCP2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de hDcp2. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo DCP2 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.