Hck Plasmide Double Nickase (h): sc-401507-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Hck Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Hck Double Nickase Plasmid (h) e il Hck Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira HCK. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Hck Antibody (G-4): sc-166463
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Hck Plasmide Double Nickase (h) | sc-401507-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Hck Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401507-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HCK codifica Hck, una tirosin-chinasi non recettoriale della famiglia Src, arricchita nelle linee ematopoietiche e mieloidi, che collega i segnali provenienti da immunorecettori e citochine a vie di segnalazione dipendenti dalla fosforilazione. Hck partecipa a percorsi che controllano l’attivazione dell’immunità innata, la segnalazione mediata dai recettori Fc, l’adesione mediata da integrine, la fagocitosi e il rimodellamento del citoscheletro, influenzando la migrazione cellulare e le risposte infiammatorie. Attraverso il cross-talk con le reti associate a PI3K/AKT, MAPK e NF-κB, Hck contribuisce a regolare proliferazione, sopravvivenza e differenziamento nelle cellule immunitarie. Un’attività o un’espressione deregolata di HCK è stata collegata a una segnalazione mieloide aberrante ed è stata studiata in contesti che includono la biologia delle leucemie e la funzione dei macrofagi associati al tumore in microambienti infiammatori.
Hck Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HCK nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HCK. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HCK. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HCK interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.