HADHB Plasmide Double Nickase (h): sc-403234-NIC

HADHB codifica la subunità beta della proteina mitocondriale trifunzionale, un complesso enzimatico fondamentale che catalizza passaggi chiave della β-ossidazione degli acidi grassi a catena lunga, inclusa l’attività tiolasi del 3-chetoacil-CoA a catena lunga. Attraverso il suo ruolo nel metabolismo energetico mitocondriale, HADHB contribuisce a mantenere la produzione cellulare di ATP e l’omeostasi lipidica, in particolare in condizioni di elevato flusso di acidi grassi. L’alterazione della funzione di HADHB è associata a disordini ereditari dell’ossidazione mitocondriale degli acidi grassi, come la carenza della proteina mitocondriale trifunzionale e la carenza della deidrogenasi del 3-idrossiacil-CoA a catena lunga, che possono manifestarsi con scompenso metabolico e cardiomiopatia. HADHB è quindi ampiamente studiato nei percorsi che collegano la disfunzione mitocondriale, lo stress ossidativo e il danno cellulare indotto dai lipidi.

HADHB Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HADHB nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HADHB. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HADHB. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HADHB interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.