GSTO1 Plasmide Double Nickase (h): sc-404107-NIC

La glutatione S-transferasi omega 1 (GSTO1) è un enzima citosolico della classe omega delle GST che utilizza il glutatione per catalizzare reazioni di tioltransferasi e di deglutationilazione, influenzando l’equilibrio redox cellulare e lo stato di S-glutationilazione delle proteine. Attraverso queste attività, GSTO1 contribuisce alla detossificazione e alla regolazione delle risposte allo stress ossidativo, intersecandosi con il metabolismo del glutatione e con vie di segnalazione più ampie controllate dal redox. Variazioni nell’espressione o nell’attività di GSTO1 sono state associate a una diversa suscettibilità al danno ossidativo e alla segnalazione infiammatoria, processi rilevanti per la neurodegenerazione, la biologia dei tumori e i contesti di stress metabolico. Nelle cellule umane, la funzione di GSTO1 viene spesso studiata in relazione alla gestione di elettrofili reattivi, alla regolazione redox-dipendente degli enzimi e a programmi trascrizionali adattativi allo stress.

GSTO1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GSTO1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GSTO1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GSTO1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GSTO1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.