GS27 Plasmide Double Nickase (h): sc-406352-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GS27 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il GS27 Double Nickase Plasmid (h) e il GS27 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GOSR2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: GS27 Antibody (F-6): sc-390261
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GS27 Plasmide Double Nickase (h) | sc-406352-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GS27 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-406352-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GOSR2 codifica GS27, uno SNARE di tipo Qb localizzato al Golgi che partecipa all’ancoraggio delle vescicole e alla fusione di membrana nella porzione iniziale della via secretoria. GS27 sostiene il traffico dal reticolo endoplasmatico (ER) al Golgi e quello intra-Golgi formando complessi SNARE che garantiscono una consegna accurata del carico, l’organizzazione del Golgi e la maturazione delle proteine. L’alterazione di GOSR2 può compromettere glicosilazione, secrezione e proteostasi, collegando il traffico dipendente da GS27 alle risposte cellulari allo stress e all’omeostasi degli organelli. Modificazioni genetiche di GOSR2 sono state associate a fenotipi neurosviluppativi e neuromuscolari, rendendolo rilevante per studi meccanicistici sulla disfunzione della via secretoria.
GS27 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GOSR2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GOSR2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GOSR2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GOSR2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.