granzyme B Double Nickaseプラスミド (m): sc-420745-NIC

マウスのGzmbは、活性化CD8+ T細胞およびNK細胞の溶解性顆粒に貯蔵され、免疫シナプスで放出されて標的細胞を排除する細胞傷害性セリンプロテアーゼであるグランザイムBをコードする。パーフォリンによって細胞質へ送達された後、グランザイムBは主要な基質を切断し、カスパーゼの活性化や、細胞死シグナルを増幅する細胞内タンパク質の分解などを通じて、アポトーシスおよび炎症性プログラムを誘導する。Gzmbの活性は細胞傷害性リンパ球のエフェクター機能の中核を成し、抗原特異的免疫を形成する。さらに、炎症環境における免疫監視、免疫病理、組織傷害といった幅広い現象に関与する。グランザイムBの発現または活性の制御異常は免疫細胞の細胞傷害能の変化と関連し、マウスモデルにおいて自己免疫様炎症の重症度、感染応答、腫瘍—免疫相互作用に影響しうることが示されている。

granzyme B ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Gzmb 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Gzmb内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Gzmbの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Gzmbが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。