GPR92 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-436329

Panoramica

Lpar5 codifica il recettore accoppiato a proteine G GPR92 (noto anche come LPA5), un recettore sensibile ai lipidi che risponde all’acido lisofosfatidico per regolare la dinamica della segnalazione intracellulare. Nelle cellule di topo, GPR92 si accoppia a proteine G eterotrimeriche per modulare vie come cAMP/PKA e il rimodellamento del citoscheletro guidato dalle GTPasi della famiglia Rho, influenzando adesione, migrazione e segnalazione infiammatoria prossimale al recettore. L’attività di Lpar5 è stata collegata al comportamento delle cellule immunitarie e a risposte associate alle barriere, mettendo in relazione la biologia dei mediatori lipidici con l’infiammazione tissutale e i segnali del microambiente. Una segnalazione LPA–GPR92 deregolata è quindi rilevante per studi meccanicistici in immunologia, biologia del cancro e rimodellamento associato alla fibrosi, senza implicare esiti clinici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GPR92 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Lpar5 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Lpar5 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Lpar5 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GPR92.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Lpar5 per lo studio della segnalazione di GPR92, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Lpar5 critici per la funzione di GPR92
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Lpar5 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal GPR92 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal GPR92 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Lpar5. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal GPR92 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR GPR92 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Lpar5 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Lpar5 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.