Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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GPR43 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401858
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GPR43 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico GPR43, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: GPR43 Antibody (3B3): sc-293202
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GPR43 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-401858 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
FFAR2 codifica GPR43, un recettore accoppiato a proteina G (GPCR) sensibile agli acidi grassi a catena corta (SCFA), attivato da acetato, propionato e butirrato prodotti dal microbiota intestinale. GPR43 si accoppia principalmente alle vie Gαi/o e Gαq per modulare la segnalazione del cAMP, i flussi di calcio intracellulare e le risposte a valle MAPK/ERK, influenzando la chemiotassi, la produzione di citochine e la regolazione immunitaria associata alla barriera. È fortemente espresso in cellule immunitarie come neutrofili e macrofagi e in tessuti metabolici, collegando i metaboliti microbici ai programmi di omeostasi infiammatoria ed energetica. Una segnalazione FFAR2/GPR43 deregolata è stata associata a disturbi infiammatori e a fenotipi metabolici, a supporto di studi meccanicistici della comunicazione ospite–microbioma in contesti rilevanti per la malattia.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GPR43 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene FFAR2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del FFAR2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto FFAR2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GPR43.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di FFAR2 per lo studio della segnalazione di GPR43, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni FFAR2 critici per la funzione di GPR43
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di FFAR2 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal GPR43 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal GPR43 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus FFAR2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal GPR43 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR GPR43 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia FFAR2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio FFAR2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.