GPR110 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405326-ACT

ADGRF1は、接着型Gタンパク質共役受容体（aGPCR）であるGPR110をコードしており、細胞膜における細胞間相互作用の調節および細胞外シグナルの統合に関与する多回膜貫通型受容体です。aGPCRとしてのGPR110は、三量体Gタンパク質と共役してセカンドメッセンジャーシグナル伝達に影響を与え、増殖・生存・分化を制御する下流プログラムを調節し得ますが、その作用は組織種により状況依存的に異なります。ADGRF1発現の変化は腫瘍生物学や発生過程の研究で報告されており、GPCR駆動性の転写および表現型の可塑性を解析する上で有用な標的となります。ADGRF1依存的なシグナルネットワークをマッピングすることで、細胞移動、幹細胞様状態、微小環境への応答性に関する機序研究に資する知見が得られます。

GPR110 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ADGRF1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

GPR110 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ADGRF1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はADGRF1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性GPR110の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のADGRF1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGPR110依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびADGRF1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGPR110経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。