GnRHR Plasmide Double Nickase (h): sc-401783-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GnRHR Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il GnRHR Double Nickase Plasmid (h) e il GnRHR Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GNRHR. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: GnRHR Antibody (GRX-5): sc-69845
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GnRHR Plasmide Double Nickase (h) | sc-401783-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GnRHR Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401783-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GNRHR codifica il recettore umano dell’ormone di rilascio delle gonadotropine (GnRHR), un recettore accoppiato a proteine G di tipo rodopsina, espresso prevalentemente nelle cellule gonadotrope dell’ipofisi. Dopo il legame con il GnRH ipotalamico, GnRHR si accoppia principalmente a Gαq/11 per attivare la fosfolipasi Cβ, aumentando la segnalazione IP3/DAG, la mobilizzazione del Ca2+ intracellulare e l’attività delle vie PKC/MAPK, così da regolare la trascrizione e la secrezione dell’ormone luteinizzante e dell’ormone follicolo-stimolante. Questo asse di segnalazione integra input endocrini pulsatile per controllare lo sviluppo riproduttivo e la fertilità, e alterazioni della funzione di GNRHR sono associate a disturbi dell’asse ipotalamo–ipofisi–gonadi, come l’ipogonadismo ipogonadotropo congenito e fenotipi endocrini riproduttivi correlati. Nei modelli cellulari, GnRHR rappresenta un nodo facilmente studiabile per analizzare la desensibilizzazione dei GPCR, il traffico dipendente da β-arrestina e la decodifica della frequenza dello stimolo.
GnRHR Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GNRHR nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GNRHR. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GNRHR. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GNRHR interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.