GlyR α4CRISPR激活质粒(h): sc-416048-ACT

GLRA4 编码甘氨酸受体 α4 亚基（GlyR α4），属于配体门控氯离子通道的组成亚基之一，可通过介导甘氨酸依赖性的膜超极化，参与中枢神经系统快速抑制性神经传递。GlyR 复合体通过氯离子电导以及与包括 GABA 能信号在内的其他抑制性通路的串扰，调控神经元兴奋性与网络同步性。尽管相较于 GLRA 家族的其他成员，GLRA4 的研究表征仍较少，但甘氨酸能受体生物学总体与运动控制、惊跳回路以及突触抑制平衡密切相关，而这些过程常与神经发育及神经精神表型有关。研究 GLRA4 有助于开展受体组装、突触功能以及与神经系统疾病相关的抑制性信号改变等机制层面的工作，但不暗示任何临床结局。

GlyR α4 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性GLRA4的表达。

GlyR α4 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的GLRA4基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于GLRA4转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性GlyR α4表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的GLRA4位点，并能够研究内源性位点上依赖于GlyR α4的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在GLRA4表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟GlyR α4通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。