Glucose Transporter Glut1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400174-NIC

SLC2A1 codifica per il trasportatore facilitativo del glucosio GLUT1, un trasportatore ad alta affinità che media l’assorbimento basale di glucosio attraverso la membrana plasmatica, sostenendo la glicolisi e il metabolismo ossidativo. L’attività di GLUT1 contribuisce all’omeostasi energetica e all’equilibrio redox, influenzando la riprogrammazione metabolica negli stati proliferativi e permettendo alle cellule di adattarsi all’ipossia tramite programmi trascrizionali regolati da HIF. In quanto determinante chiave della disponibilità di glucosio, SLC2A1 si integra con la segnalazione di AMPK e mTOR attraverso meccanismi di feedback legati al sensing dei nutrienti e influisce su processi quali angiogenesi, trasporto attraverso la barriera emato-encefalica e attivazione delle cellule immunitarie. Alterazioni dell’espressione o della funzione di SLC2A1 sono associate a disfunzioni metaboliche e sono state implicate nel metabolismo del cancro e in difetti neurologici del trasporto di glucosio.

Glucose Transporter Glut1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SLC2A1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SLC2A1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SLC2A1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SLC2A1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.