GIT2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-424063

Panoramica

GIT2 (G protein-coupled receptor kinase-interacting ArfGAP 2) è una proteina scaffold ArfGAP con attività di attivazione delle GTPasi ARF che coordina il traffico di membrana e il rimodellamento del citoscheletro, integrando segnali provenienti da chinasi associate ai GPCR e da piccole GTPasi. Nelle cellule di topo, GIT2 agisce all’interno di complessi di segnalazione paxillin/PIX/PAK per regolare il turnover delle adesioni focali, l’espansione (spreading) cellulare e la migrazione direzionale, collegando questi processi alla dinamica dell’actina e all’endocitosi. Contribuisce inoltre alla segnalazione responsiva allo stress e all’internalizzazione dei recettori, mettendo in relazione reti di adesione e di segnalazione che modellano le risposte cellulari agli stimoli ambientali. Vie associate a GIT2 deregolate sono state studiate in contesti caratterizzati da motilità alterata e segnalazione infiammatoria, a supporto della sua rilevanza in studi meccanicistici del rimodellamento tissutale e del comportamento cellulare associato a malattie.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GIT2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Git2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Git2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Git2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GIT2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Git2 per lo studio della segnalazione di GIT2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Git2 critici per la funzione di GIT2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Git2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal GIT2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal GIT2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Git2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal GIT2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR GIT2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Git2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Git2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.