GHR Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-420549-ACT

Il gene murino **Ghr** codifica il recettore dell’ormone della crescita (GHR), un recettore citochinico transmembrana che si lega all’ormone della crescita per regolare la crescita somatica, il metabolismo e l’omeostasi dei tessuti. Il legame con il ligando promuove la dimerizzazione del recettore e l’attivazione di JAK2, innescando la segnalazione a valle mediata da STAT5 e il cross-talk con le vie PI3K–AKT e MAPK/ERK, per controllare programmi trascrizionali legati a proliferazione, differenziamento e utilizzo dei nutrienti. L’attività di GHR modella la produzione epatica di IGF-1 e influenza la fisiologia di tessuto adiposo, muscolo e osso, rendendolo un elemento centrale nella regolazione endocrina della crescita e del bilancio energetico. Un’alterata segnalazione di GHR è stata associata a fenotipi di crescita modificati e a disfunzioni metaboliche, ed è spesso studiata nell’ambito della biologia dello sviluppo, dell’invecchiamento e del rimodellamento delle vie endocrine.

GHR Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Ghr senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

GHR Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Ghr nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Ghr, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di GHR. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Ghr nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da GHR nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via GHR nelle cellule tumorali con espressione di Ghr silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.