GFRαL CRISPR Activationプラスミド (h): sc-415831-ACT

ヒトGFRAL（GDNF family receptor alpha-like）遺伝子は、GDF15に応答するRETシグナル伝達においてリガンド特異性を付与する、GPIアンカー型の共受容体GFRαLをコードします。この受容体複合体は後脳ニューロンで高発現しており、細胞外のシグナルをMAPK/ERKやPI3K/AKTなどの細胞内キナーゼカスケードへと結び付け、全身のエネルギーバランスに関与する神経活動や転写プログラムを形成します。GDF15–GFRαL–RET軸の活性変化は、代謝調節異常や悪液質関連の生物学と関連付けられており、GFRALは食欲やストレスに伴う体重変動の神経内分泌的制御を解明するための有用な切り口となります。in vitroでは、GFRAL発現の調節により、受容体トラフィッキング、リガンド依存的シグナル伝達、ならびに下流の遺伝子ネットワークを、関連するニューロンモデルやエンジニアリングした細胞モデルで解析する研究が可能になります。

GFRαL CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GFRALの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

GFRαL CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GFRAL 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGFRAL転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性GFRαLの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGFRAL遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGFRαL依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGFRAL発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGFRαL経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。