GCP-2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422852

Panoramica

Cxcl5 codifica la granulocyte chemotactic protein-2 (GCP-2), una chemokina CXC secreta che segnala principalmente attraverso CXCR2, promuovendo la chemiotassi, l’attivazione e il traffico dei neutrofili durante l’infiammazione acuta. Nei tessuti murini, CXCL5 è indotta da stimoli pro-infiammatori e partecipa alle reti di citochine e chemokine a valle delle vie di segnalazione NF-κB e MAPK, plasmando il reclutamento leucocitario e i microambienti immunitari locali. Questo asse contribuisce alla regolazione delle interazioni endoteliali, del rimodellamento tissutale e delle risposte di difesa dell’ospite. Una segnalazione CXCL5/GCP-2 deregolata è stata associata a patologie infiammatorie e all’infiammazione associata ai tumori, rendendola rilevante per studi sulla biologia mieloide, sui tessuti di barriera e sui meccanismi di malattia immuno-mediati.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GCP-2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Cxcl5 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Cxcl5 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Cxcl5 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GCP-2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Cxcl5 per lo studio della segnalazione di GCP-2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Cxcl5 critici per la funzione di GCP-2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Cxcl5 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal GCP-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal GCP-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Cxcl5. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal GCP-2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR GCP-2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Cxcl5 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Cxcl5 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.