GCN5 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-420512-ACT

Kat2a em camundongo codifica a GCN5, uma acetiltransferase de lisina que acetila a histona H3 (incluindo H3K9 e H3K14) para promover a acessibilidade da cromatina e a ativação transcricional. Como componente central de complexos coativadores multissubunitários, como SAGA e ATAC, a GCN5 integra sinais com programas de expressão gênica dependentes da RNA polimerase II que controlam a progressão do ciclo celular, a diferenciação e respostas ao estresse. A atividade de Kat2a influencia a dinâmica de enhancers e promotores, a resposta a danos no DNA e a regulação de genes metabólicos por meio de acetilação coordenada de histonas e coativação de fatores de transcrição. O controle epigenético dependente de GCN5, quando desregulado, tem sido associado à proliferação aberrante e à especificação de linhagem, tornando Kat2a um ponto útil para modelar mecanismos dirigidos pela cromatina em estados celulares relevantes para doenças.

GCN5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Kat2a sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GCN5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Kat2a em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Kat2a, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GCN5. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Kat2a nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GCN5 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GCN5 em células tumorais com expressão de Kat2a silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.