GCK Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400852-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- GCKO plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase GCK (h) e o Plasmídeo Double Nickase GCK (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para GCK. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:GCK Anticorpo (G-6): sc-17819
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
GCK Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-400852-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GCK Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-400852-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
A glucocinase (GCK) codifica a enzima hexoquinase IV, que fosforila a glicose em glicose-6-fosfato, atuando como um sensor-chave de glicose que acopla a disponibilidade extracelular de glicose ao metabolismo celular. Nas células β pancreáticas, a atividade da GCK ajuda a definir o limiar para a secreção de insulina estimulada por glicose, enquanto nos hepatócitos sustenta o fluxo glicolítico e a síntese de glicogênio por meio da integração com a glicólise, a regulação da gliconeogênese e programas metabólicos responsivos a carboidratos. Ao controlar a entrada de glicose no metabolismo central do carbono, a GCK influencia o equilíbrio ATP/ADP, a sinalização por metabólitos e vias a jusante ligadas à secreção de insulina e à utilização hepática de glicose. Perturbações genéticas e funcionais de GCK estão fortemente associadas a alterações da homeostase da glicose e a formas monogênicas de disglicemia, tornando-a um alvo amplamente utilizado em estudos mecanísticos de regulação metabólica.
GCK O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus GCK em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de GCK. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função GCK. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com GCK interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.