GATA4 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h2): sc-400122-LAC-2

O GATA4 humano codifica um fator de transcrição do tipo dedo de zinco que se liga a motivos GATA para regular programas gênicos que controlam o desenvolvimento cardíaco, a diferenciação de cardiomiócitos e a formação de órgãos derivados do endoderma, incluindo fígado e pâncreas. O GATA4 atua de forma integrada com cofattatores como TBX5, NKX2-5 e proteínas FOG para modular a atividade de enhancers e o estado da cromatina em vias que governam a morfogênese, a especificação do destino celular e a transcrição responsiva ao estresse no coração. A disrupção genética ou a regulação alterada de GATA4 está associada a cardiopatias congênitas e foi relacionada ao remodelamento cardíaco e a alguns tipos de câncer por meio de seus efeitos sobre redes transcricionais específicas de linhagem. A edição gênica ou a perturbação de GATA4 é amplamente utilizada para dissecar a função de enhancers, modelar fenótipos do desenvolvimento em linhagens derivadas de iPSCs e mapear circuitos transcricionais ao combinar estratégias de knockout/knock-in com RNA-seq e perfilamento epigenômico.

As Partículas de Ativação Lentivirais GATA4 (h2) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de GATA4 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais GATA4 (h2) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição GATA4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de GATA4. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo GATA4 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.