GATA3 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-420495-LAC

Il gene murino Gata3 codifica GATA3, un fattore di trascrizione a dita di zinco che si lega ai motivi GATA per controllare programmi genici specifici di linea durante l’embriogenesi e lo sviluppo del sistema immunitario. Nelle cellule ematopoietiche, GATA3 è un regolatore centrale della differenziazione delle cellule T, inclusa la polarizzazione Th2, e coordina l’espressione di citochine e recettori tramite il rimodellamento degli enhancer e cambiamenti nell’accessibilità della cromatina. GATA3 contribuisce anche alla differenziazione epiteliale e alla funzione di barriera, collegando il controllo trascrizionale alla segnalazione dello sviluppo e all’omeostasi tissutale. Reti trascrizionali dipendenti da GATA3 deregolate vengono utilizzate come modelli meccanicistici di squilibrio immunitario, fenotipi infiammatori e programmi oncogenici o oncosoppressivi dipendenti dal contesto in sistemi murini.

Le particelle di attivazione lentivirale GATA3 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Gata3 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale GATA3 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Gata3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di GATA3. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Gata3 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.