GATA3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400134-ACT

GATA3 codifica un fattore di trascrizione a dita di zinco che si lega ai motivi GATA per regolare programmi genici specifici di linea, con ruoli di primo piano nella differenziazione delle cellule T, nell’espressione delle citochine Th2 e nell’identità delle cellule epiteliali. Nelle cellule immunitarie, GATA3 integra segnali provenienti da vie come Notch e dalla segnalazione STAT indotta da citochine per coordinare il rimodellamento della cromatina e reti trascrizionali che modellano lo sviluppo e la funzione effettrice. Nei contesti epiteliali, contribuisce alla differenziazione e al mantenimento di stati trascrizionali specifici del tessuto. Un’attività di GATA3 deregolata è stata associata a un’alterata polarizzazione immunitaria e a programmi trascrizionali oncogenici, rendendolo un nodo utile per studi meccanicistici della regolazione genica e del controllo del destino cellulare.

GATA3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di GATA3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

GATA3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus GATA3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione GATA3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di GATA3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus GATA3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da GATA3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via GATA3 nelle cellule tumorali con espressione di GATA3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.