GATA-2 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-420494-LAC

Il gene murino **Gata2** codifica il fattore di trascrizione GATA-2, una proteina che si lega al DNA tramite dita di zinco e che regola programmi genici che controllano il mantenimento delle cellule staminali e progenitrici ematopoietiche, l’impegno di linea e lo sviluppo vascolare. GATA-2 coordina reti trascrizionali con altri regolatori ematopoietici e cofattori associati alla cromatina per modulare l’attività degli enhancer e gli output di segnalazione responsivi alle citochine durante lo sviluppo e l’omeostasi. Un’attività di GATA-2 deregolata altera l’autorinnovamento delle cellule staminali e le traiettorie di differenziamento ed è spesso studiata in modelli di insufficienza midollare, mielodisplasia, biologia della leucemia e disfunzione endoteliale. Queste funzioni rendono **Gata2** un nodo centrale per lo studio del controllo trascrizionale dell’ematopoiesi, della biologia vascolare e della regolazione genica in risposta allo stress nei sistemi murini.

Le particelle di attivazione lentivirale GATA-2 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Gata2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale GATA-2 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Gata2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di GATA-2. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Gata2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.