G_{α o} Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400897

Panoramica

GNAO1 codifica la subunità alfa Gαo della proteina G eterotrimerica umana, un componente di segnalazione dominante della famiglia Gi/o, arricchito nei neuroni, che collega i GPCR attivati all’inibizione dell’adenilato ciclasi e alla modulazione dei canali ionici. Attraverso la regolazione della segnalazione cAMP/PKA, dell’attività dei canali del Ca2+ e del K+, e delle vie a valle MAPK e di rilascio dei neurotrasmettitori, Gαo modella la trasmissione sinaptica, l’eccitabilità neuronale e lo sviluppo delle reti neuronali. Un’alterazione della funzione di GNAO1 è associata a fenotipi di disturbi del neurosviluppo e del movimento, rendendolo un nodo chiave per interrogare l’architettura della segnalazione guidata dai GPCR in modelli cellulari e neuronali. La perturbazione sperimentale di GNAO1 supporta studi meccanicistici sulla specificità dell’accoppiamento recettoriale, sulla dinamica dei secondi messaggeri e sulle risposte trascrizionali dipendenti dall’attività.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Gα o (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene GNAO1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del GNAO1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto GNAO1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Gα o.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di GNAO1 per lo studio della segnalazione di Gα o, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni GNAO1 critici per la funzione di Gα o
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di GNAO1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Gα o CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Gα o CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus GNAO1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Gα o Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Gα o (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia GNAO1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio GNAO1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.