galectin-4 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404255-ACT

LGALS4 umano codifica la galectina-4, una lectina legante i β-galattosidi arricchita nell’epitelio gastrointestinale, che contribuisce alla polarità epiteliale, all’adesione cellula–cellula e cellula–matrice e all’organizzazione della barriera mucosale. La galectina-4 interagisce con recettori glicosilati e microdomini di membrana per modulare traffico intracellulare, segnalazione e programmi di differenziamento cellulare, con collegamenti a vie che regolano l’infiammazione, la comunicazione immuno–epiteliale e l’omeostasi dell’epitelio. Un’espressione deregolata di LGALS4 è stata riportata in patologie gastrointestinali e nella biologia dei tumori, dove alterazioni delle interazioni lectina–glicano possono influenzare invasività, migrazione e il contesto immunitario del microambiente. In quanto lectina secreta e associata alla membrana, la galectina-4 è anche utilizzata come marcatore per studiare le transizioni di stato dell’epitelio e la segnalazione dipendente dalla glicosilazione.

galectin-4 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di LGALS4 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

galectin-4 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus LGALS4 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione LGALS4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di galectin-4. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus LGALS4 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da galectin-4 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via galectin-4 nelle cellule tumorali con espressione di LGALS4 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.