galectin-3 Plasmide Double Nickase (h): sc-417680-NIC

LGALS3 codifica la galectina-3, una lectina legante i β-galattosidi che si localizza nel citoplasma, nel nucleo, sulla superficie cellulare e nel compartimento extracellulare, dove regola le interazioni cellula–cellula e cellula–matrice. La galectina-3 modula processi chiave, tra cui la resistenza all’apoptosi, l’adesione e la migrazione cellulare, l’endocitosi e la segnalazione dell’immunità innata, attraverso l’impalcatura glicano-dipendente di recettori e integrine. Influenza i programmi infiammatori e fibrotici plasmando l’attivazione dei macrofagi e le reti citochiniche, e interagisce con vie quali MAPK/ERK, PI3K/AKT, NF-κB e la segnalazione TGF-β. Un’espressione deregolata della galectina-3 è associata alla progressione tumorale e alla biologia delle metastasi, all’infiammazione cronica e alla fibrosi, rendendo LGALS3 un nodo utile per studi meccanicistici in immunologia, oncologia e rimodellamento tissutale.

galectin-3 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus LGALS3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di LGALS3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di LGALS3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con LGALS3 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.