GALE Double Nickaseプラスミド (h): sc-408127-NIC

GALEはUDP-ガラクトース4-エピメラーゼをコードする細胞質酵素で、UDP-ガラクトースとUDP-グルコースを可逆的に相互変換します。さらに、アミノ糖代謝に必要なUDP-GalNAc/UDP-GlcNAcのエピメラーゼ反応も触媒します。これらの反応を通じて、GALEはガラクトース利用のレロワール経路を支えるとともに、グリコシル化に必要な糖ヌクレオチド基質を供給し、分泌経路におけるプロテオグリカンおよび糖タンパク質の生合成に影響を与えます。GALE活性が変動すると細胞内の糖質恒常性が乱れ、グリカン組成が変化しうるため、その下流でタンパク質の折りたたみ、輸送、シグナル伝達にも影響が及びます。ヒトではGALEの機能障害がガラクトース血症の一部病型と関連しており、本遺伝子はモデル系において、代謝ストレス応答やグリコシル化に結び付いた表現型を研究するうえで有用な標的となります。

GALE ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における GALE 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、GALE内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、GALEの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、GALEが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。