FXR1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402570-ACT

FXR1 (proteína 1 relacionada à síndrome do X frágil com deficiência intelectual) é uma proteína de ligação a RNA que regula a expressão gênica pós-transcricional por meio do controle da estabilidade, localização e tradução de mRNAs. Ela se associa a complexos ribonucleoproteicos e a grânulos de estresse, integrando sinais de sinalização com o metabolismo de RNA para moldar a produção do proteoma durante a proliferação, diferenciação e respostas ao estresse. A FXR1 contribui para a organização do citoesqueleto e para o controle do ciclo celular ao modular a tradução de transcritos relevantes para vias de sinalização, conectando a regulação de RNA a processos como migração e sobrevivência. Alterações na expressão ou na atividade de FXR1 têm sido implicadas em contextos de biologia tumoral e em fenótipos neuromusculares e de neurodesenvolvimento, tornando-a um alvo útil para estudos mecanísticos de redes regulatórias de RNA.

FXR1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FXR1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FXR1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FXR1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FXR1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FXR1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FXR1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FXR1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FXR1 em células tumorais com expressão de FXR1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.