FRY Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404629

Panoramica

FRY (furry homolog) codifica una grande proteina scaffold, evolutivamente conservata, che agisce a valle delle chinasi serina/treonina della famiglia NDR/LATS, coordinando segnali che regolano la polarità cellulare, l’organizzazione del citoscheletro e il traffico vescicolare polarizzato. Attraverso queste vie, FRY contribuisce al controllo della morfogenesi cellulare, della migrazione e dell’organizzazione epiteliale, processi strettamente legati allo sviluppo e all’omeostasi dei tessuti. Alterazioni della funzione di FRY sono state associate a una deregolazione dei segnali di crescita e a difetti di polarità, frequentemente implicati nella biologia del cancro e in altri disturbi caratterizzati da un’architettura cellulare compromessa. In quanto modulatore di reti di segnalazione centrate su chinasi, FRY è di interesse per studi meccanicistici sulla regolazione correlata a Hippo, sulla dinamica del citoscheletro e su risposte allo stress specifiche del contesto.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO FRY (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene FRY in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del FRY insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto FRY a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina FRY.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di FRY per lo studio della segnalazione di FRY, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni FRY critici per la funzione di FRY
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di FRY per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal FRY CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal FRY CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus FRY. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal FRY Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR FRY (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia FRY per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio FRY definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.