frizzled-7 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420437

Panoramica

Il gene murino Fzd7 codifica frizzled-7, un recettore Wnt a sette domini transmembrana che trasduce i ligandi Wnt extracellulari in risposte di segnalazione intracellulari. Frizzled-7 regola programmi trascrizionali dipendenti da β-catenina, nonché le vie non canoniche della planar cell polarity e Wnt/Ca²⁺, influenzando proliferazione, polarità, migrazione e decisioni di destino cellulare durante lo sviluppo e l’omeostasi dei tessuti. Alterazioni della segnalazione di Fzd7 sono state collegate a una disregolazione del comportamento di cellule staminali/progenitrici e all’attivazione di vie oncogeniche in molteplici modelli sperimentali, rendendolo un utile punto di ingresso per analizzare il controllo della rete Wnt. Nei sistemi cellulari, la perturbazione di Fzd7 è comunemente usata per interrogare la specificità della segnalazione Wnt a livello di recettore e il crosstalk con i processi associati ai recettori tirosin-chinasici e alla via Hippo/YAP.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO frizzled-7 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Fzd7 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Fzd7 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Fzd7 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina frizzled-7.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Fzd7 per lo studio della segnalazione di frizzled-7, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Fzd7 critici per la funzione di frizzled-7
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Fzd7 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal frizzled-7 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal frizzled-7 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Fzd7. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal frizzled-7 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR frizzled-7 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Fzd7 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Fzd7 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.