FRAT1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406922

Panoramica

FRAT1 (frequently rearranged in advanced T-cell lymphomas 1) codifica un regolatore positivo della via Wnt/β-catenina che promuove l’output del segnale inibendo eventi di fosforilazione dipendenti da GSK3, stabilizzando così la β-catenina e potenziando programmi trascrizionali legati a proliferazione e differenziamento. Modulando componenti citoplasmatiche e nucleari della segnalazione Wnt, FRAT1 influenza le decisioni sul destino cellulare, la progressione del ciclo cellulare e il controllo, dipendente dal contesto, della migrazione. Alterazioni dell’espressione di FRAT1 sono state riportate in molteplici tipi di tumore e il gene è spesso studiato come nodo di collegamento tra l’attività della via Wnt e reti trascrizionali oncogeniche. FRAT1 è quindi rilevante per analizzare il crosstalk tra vie di segnalazione che influenza stati “stem-like”, programmi associati alla transizione epitelio-mesenchimale (EMT) e la regolazione trascrizionale dipendente dal segnale nelle cellule umane.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO FRAT1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene FRAT1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del FRAT1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto FRAT1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina FRAT1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di FRAT1 per lo studio della segnalazione di FRAT1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni FRAT1 critici per la funzione di FRAT1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di FRAT1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal FRAT1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal FRAT1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus FRAT1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal FRAT1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR FRAT1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia FRAT1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio FRAT1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.