Fra1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400527-LAC

FOSL1 codifica Fra1 (Fos-like antigen 1), un fattore di trascrizione con motivo basic leucine zipper che eterodimerizza con le proteine JUN per formare il complesso AP-1 e regolare programmi di espressione genica dipendenti dagli stimoli. Fra1 integra segnali provenienti da MAPK/ERK, JNK e da altre vie sensibili allo stress per modulare la progressione del ciclo cellulare, la differenziazione, la migrazione e il rimodellamento della matrice extracellulare. Un’attività disregolata di FOSL1 è stata collegata a reti trascrizionali oncogeniche, fenotipi di tipo transizione epitelio-mesenchimale e alterazioni della segnalazione infiammatoria in molteplici contesti tissutali. In quanto regolatore trascrizionale, Fra1 è spesso utilizzato come nodo per studiare la regolazione genica guidata dagli enhancer e il crosstalk tra vie di segnalazione a valle di fattori di crescita e citochine.

Le particelle di attivazione lentivirale Fra1 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di FOSL1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Fra1 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione FOSL1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Fra1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo FOSL1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.