FOXP3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400542-ACT

FOXP3 codifica un fattore di trascrizione della famiglia forkhead che funge da regolatore determinante di linea dei linfociti T regolatori CD4⁺, coordinando la tolleranza immunitaria e limitando risposte infiammatorie eccessive. Modellando programmi trascrizionali a valle della segnalazione del recettore dei linfociti T e di vie citochiniche come IL-2/STAT5 e TGF-β/SMAD, FOXP3 modula la produzione di citochine effettrici, il rimodellamento metabolico e la funzione soppressiva. Un’espressione o attività di FOXP3 deregolata è associata alla perdita della tolleranza periferica e a un’ampia patologia immunitaria, e i linfociti T FOXP3-positivi infiltranti il tumore sono studiati per il loro ruolo in microambienti immunosoppressivi. Queste caratteristiche rendono FOXP3 un nodo chiave per analizzare le reti di regolazione genica che controllano l’omeostasi immunitaria.

FOXP3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di FOXP3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

FOXP3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus FOXP3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione FOXP3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di FOXP3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus FOXP3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da FOXP3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via FOXP3 nelle cellule tumorali con espressione di FOXP3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.