FOXJ1 Plasmide Double Nickase (h): sc-402226-NIC

FOXJ1 (forkhead box J1) codifica un fattore di trascrizione della famiglia forkhead che agisce da regolatore maestro della ciliogenesi motile, coordinando l’ancoraggio dei corpi basali, l’assemblaggio dell’assonema e la differenziazione delle cellule epiteliali multiciliate. Controlla i programmi trascrizionali necessari per il battito ciliare e la clearance mucociliare, collegando la polarità epiteliale e l’organizzazione del citoscheletro alla segnalazione dipendente dalle ciglia e al flusso dei fluidi. L’attività di FOXJ1 è centrale nelle linee cellulari delle vie aeree e dell’ependyma, dove una regolazione precisa sostiene l’omeostasi tissutale e la patterning dello sviluppo. Un’espressione deregolata di FOXJ1 o una ciliogenesi guidata da FOXJ1 compromessa è associata a fenotipi umani correlati alle ciliopatie, inclusi difetti della funzione mucociliare e anomalie ependimali rilevanti per l’idrocefalo.

FOXJ1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus FOXJ1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di FOXJ1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di FOXJ1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con FOXJ1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.