FOXI1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-420369-ACT

Foxi1 codifica o fator de transcrição forkhead box FOXI1, um regulador nuclear que ajuda a especificar o destino de células epiteliais e controla programas gênicos necessários para o transporte de íons e a homeostase ácido–base. Em camundongos, a atividade de FOXI1 está intimamente ligada à diferenciação e à função das células intercaladas no ducto coletor renal e ao desenvolvimento epitelial no ouvido interno, influenciando a expressão de transportadores e canais envolvidos na regulação do pH. Por meio dessas redes transcricionais, Foxi1 se conecta a vias que governam a maturação epitelial, o transporte de membrana e a homeostase tecidual. A desregulação de programas dependentes de FOXI1 é relevante para pesquisas sobre disfunção tubular renal e biologia da audição sensorioneural, nas quais alterações na especificação epitelial e na expressão de transportadores podem contribuir para fenótipos associados a doenças.

FOXI1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Foxi1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FOXI1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Foxi1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Foxi1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FOXI1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Foxi1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FOXI1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FOXI1 em células tumorais com expressão de Foxi1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.