FOXE3 Plasmide Double Nickase (h): sc-404466-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- FOXE3 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il FOXE3 Double Nickase Plasmid (h) e il FOXE3 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira FOXE3. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: FOXE3 Antibody (G-1): sc-393526
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
FOXE3 Plasmide Double Nickase (h) | sc-404466-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
FOXE3 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404466-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FOXE3 codifica un fattore di trascrizione della famiglia forkhead box essenziale per lo sviluppo del segmento anteriore e del cristallino, nel quale regola programmi di espressione genica che controllano proliferazione, differenziamento e mantenimento dell’identità delle cellule epiteliali del cristallino. Attraverso il legame al DNA mediato dal suo dominio forkhead, FOXE3 influenza reti trascrizionali dello sviluppo e processi legati al ciclo cellulare che modellano la morfogenesi oculare e preservano la trasparenza dei tessuti. La deregolazione o la perdita di funzione di FOXE3 è associata a patologie oculari congenite, incluse disgenesia del segmento anteriore e fenotipi di cataratta, rendendolo un bersaglio rilevante per lo studio dello sviluppo oculare umano e dei meccanismi di malattia. FOXE3 è quindi ampiamente utilizzato come marcatore e regolatore in modelli di biologia del cristallino, controllo trascrizionale e genetica dello sviluppo.
FOXE3 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus FOXE3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di FOXE3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di FOXE3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con FOXE3 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.