FOXC2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402351-ACT

FOXC2 (forkhead box C2) è un fattore di trascrizione umano della famiglia forkhead che, durante lo sviluppo e nell’omeostasi dei tessuti adulti, determina l’identità delle cellule mesenchimali ed endoteliali. Regola reti geniche coinvolte nella linfangiogenesi, nel rimodellamento vascolare, nella transizione epitelio–mesenchimale, nell’organizzazione della matrice extracellulare e nella dinamica del citoscheletro, intersecando assi di segnalazione come TGF-β, Notch e le vie dipendenti da VEGF. L’attività di FOXC2 influenza la migrazione cellulare e l’invasività attraverso il controllo trascrizionale di geni dell’adesione e della motilità, e un’alterata espressione di FOXC2 è stata associata alla progressione metastatica in molteplici contesti tumorali. L’alterazione germinale di FOXC2 è collegata alla sindrome linfedema–distichiasi, evidenziando il suo ruolo nella formazione delle valvole linfatiche e nella funzione del sistema linfatico.

FOXC2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di FOXC2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

FOXC2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus FOXC2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione FOXC2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di FOXC2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus FOXC2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da FOXC2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via FOXC2 nelle cellule tumorali con espressione di FOXC2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.