FMNL3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406244

Panoramica

FMNL3 (proteina formin-like 3) è un fattore di nucleazione e allungamento dell’actina regolato dalle Rho GTPasi, che coordina il rimodellamento del citoscheletro di actina corticale. Favorisce la formazione di filopodi e lamellipodi, regola la polarità cellulare e contribuisce alla migrazione direzionale attraverso vie collegate alla segnalazione di CDC42/RAC e alla dinamica del citoscheletro. L’attività di FMNL3 influenza la protrusione di membrana, il turnover delle adesioni e i processi di traffico intracellulare che dipendono dall’assemblaggio dell’actina. Un’espressione o una segnalazione di FMNL3 deregolate sono state associate a fenotipi rilevanti per l’invasione e la metastatizzazione delle cellule tumorali in molteplici sistemi modello, rendendola un bersaglio utile per studi meccanicistici della motilità e del controllo del citoscheletro.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO FMNL3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene FMNL3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del FMNL3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto FMNL3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina FMNL3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di FMNL3 per lo studio della segnalazione di FMNL3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni FMNL3 critici per la funzione di FMNL3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di FMNL3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal FMNL3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal FMNL3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus FMNL3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal FMNL3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR FMNL3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia FMNL3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio FMNL3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.