FIG4 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404404-ACT

FIG4は、エンドリソソーム膜ダイナミクスに不可欠な脂質シグナルであるホスファチジルイノシトール3,5-二リン酸（PI(3,5)P2）のターンオーバーを調節する、SACドメイン含有ホスホイノシチド5-ホスファターゼをコードする。FIG4はPIKfyve複合体との機能的カップリングを介して、小胞輸送、液胞／リソソームの恒常性、オートファジーフラックス、ならびにエンドソーム成熟を形作る膜の分裂・融合イベントの制御に寄与する。FIG4活性が攪乱されるとホスホイノシチドバランスが崩れ、エンドリソソームストレスに対する神経系の高い感受性を反映して、神経の維持やミエリン生物学の異常と関連する。その結果、リソソーム機能不全や輸送障害が中核機序となる神経変性や末梢神経障害のモデルにおいて、FIG4は頻繁に研究対象となっている。

FIG4 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性FIG4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

FIG4 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における FIG4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はFIG4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性FIG4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のFIG4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるFIG4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびFIG4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるFIG4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。