Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Ferrochelatase Plasmide Double Nickase (h): sc-402043-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Ferrochelatase Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Ferrochelatase Double Nickase Plasmid (h) e il Ferrochelatase Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira FECH. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Ferrochelatase Antibody (A-3): sc-377377
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Ferrochelatase Plasmide Double Nickase (h) | sc-402043-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Ferrochelatase Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402043-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene umano **FECH** codifica la **ferrochelatasi**, l’enzima terminale della biosintesi dell’eme che catalizza l’inserimento del ferro bivalente (Fe²⁺) nella protoporfirina IX per formare eme nella matrice mitocondriale. Questa attività sostiene il metabolismo ossidativo fornendo gruppi prostetici eme per emoglobina, mioglobina, citocromi, catalasi e sintasi dell’ossido nitrico. La funzione di FECH si integra con la gestione mitocondriale del ferro, il metabolismo delle porfirine e l’omeostasi redox, rendendolo centrale per la respirazione cellulare e per la gestione delle specie reattive dell’ossigeno. La disregolazione di FECH è associata ad accumulo di porfirine e a fenotipi da carenza di eme, incluse porfirie ereditarie come la protoporfiria eritropoietica, ed è studiata in contesti di anemia, disfunzione mitocondriale e stress cellulare associato alla fotosensibilità.
Ferrochelatase Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus FECH nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di FECH. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di FECH. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con FECH interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.