FBXO10 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-406159-ACT

FBXO10は、SCF（SKP1–CUL1–F-box）型E3ユビキチンリガーゼ複合体において基質認識を担うF-boxタンパク質をコードし、特定のタンパク質をユビキチン化してプロテアソーム依存的な分解へと導きます。制御されたタンパク質分解を介して、FBXO10はシグナル伝達の強度、細胞周期やストレス応答プログラムの制御、ならびにプロテオスタシス（タンパク質恒常性）の維持に寄与します。SCF介在性のユビキチンシグナルの破綻やFBXO10活性の変化は、異常な生存シグナルやリンパ系の生物学と関連づけられており、アポトーシス、がん原性経路のバッファリング、免疫細胞の恒常性に関する研究における重要性を裏づけています。そのためFBXO10は、ユビキチン–プロテアソーム系のネットワーク構造や、状況依存的に主要経路ノードがどのように制御されるかを解明するうえで注目されています。

FBXO10 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性FBXO10の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

FBXO10 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における FBXO10 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はFBXO10転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性FBXO10の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のFBXO10遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるFBXO10依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびFBXO10発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるFBXO10経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。