FBP2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404139-ACT

KHSRP codifica a proteína reguladora de splicing do tipo KH (FBP2), um fator de ligação a RNA que coordena a regulação gênica pós-transcricional ao controlar o splicing do pré‑mRNA, a estabilidade, a localização e a tradução do mRNA. A FBP2 interage com elementos ricos em AU e com motivos de RNA ricos em G, modulando programas de metabolismo de RNA que moldam a diferenciação celular, as respostas ao estresse e os desfechos de sinalização inflamatória. Por meio de suas funções no processamento e na renovação/degradação de RNA, KHSRP influencia vias associadas à proliferação e à apoptose, e alterações na atividade de KHSRP têm sido associadas a assinaturas de expressão gênica desreguladas observadas em contextos de biologia do câncer, disfunção imune e doenças neurológicas. Essas propriedades tornam KHSRP um alvo útil para dissecar redes de regulação por RNA e seu impacto em transições de estado celular.

FBP2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de KHSRP sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FBP2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus KHSRP em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição KHSRP, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FBP2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus KHSRP nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FBP2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FBP2 em células tumorais com expressão de KHSRP silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.