FBP1 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-424568-ACT

Il gene murino *Fubp1* codifica la far upstream element-binding protein 1 (FBP1), un regolatore che lega acidi nucleici a singolo filamento e che modula la trascrizione e il metabolismo dell’mRNA interagendo con elementi regolatori distali a monte e coordinando le dinamiche trascrizionali. FBP1 influenza la progressione del ciclo cellulare, i programmi genici responsivi allo stress e il controllo post-trascrizionale attraverso interazioni con complessi associati ai promotori e con il macchinario di processamento dell’RNA. Un’attività deregolata di FUBP1/FBP1 è stata collegata a proliferazione alterata e al controllo dello stato di linea, a supporto del suo impiego come nodo meccanicistico negli studi sulla regolazione trascrizionale oncogenica e sulla stabilità del genoma. Nei sistemi di modello murini, perturbare l’espressione di *Fubp1* è rilevante per analizzare il reclutamento di fattori di trascrizione, la regolazione associata alla cromatina e le vie che accoppiano i segnali di crescita all’output di espressione genica.

FBP1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Fubp1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

FBP1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Fubp1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Fubp1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di FBP1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Fubp1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da FBP1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via FBP1 nelle cellule tumorali con espressione di Fubp1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.