FAST-1/2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420290

Panoramica

Foxh1 (FAST-1/2) è un fattore di trascrizione della famiglia forkhead box che agisce come principale effettore nucleare della segnalazione Activin/Nodal–TGF-β nello sviluppo del topo. In associazione con i complessi SMAD2/3–SMAD4, regola programmi trascrizionali che controllano l’induzione del mesendoderma, la specificazione dell’asse sinistra–destra e le prime decisioni di patterning. Le reti geniche dipendenti da Foxh1 intersecano vie che governano le transizioni epitelio–mesenchimali e l’impegno di lignaggio, rendendolo un nodo ampiamente utilizzato per analizzare il controllo trascrizionale dipendente dai segnali. L’alterazione di questo asse è rilevante per le malformazioni dello sviluppo e per studi meccanicistici sulla riprogrammazione trascrizionale guidata da TGF-β in contesti associati a patologie.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO FAST-1/2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Foxh1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Foxh1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Foxh1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina FAST-1/2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Foxh1 per lo studio della segnalazione di FAST-1/2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Foxh1 critici per la funzione di FAST-1/2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Foxh1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal FAST-1/2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal FAST-1/2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Foxh1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal FAST-1/2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR FAST-1/2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Foxh1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Foxh1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.