FAPα Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-401511-LAC

La proteina di attivazione dei fibroblasti alfa (FAPα, gene FAP) è una serina proteasi transmembrana di tipo II della famiglia delle dipeptidil peptidasi, dotata sia di attività di dipeptidil peptidasi sia di endopeptidasi. È tipicamente arricchita nei fibroblasti attivati e nelle cellule stromali perivascolari, dove contribuisce al rimodellamento della matrice extracellulare, al turnover del collagene e alla regolazione dell’architettura tissutale. Attraverso l’elaborazione proteolitica di substrati della matrice e di substrati associati alla segnalazione, FAPα influenza le interazioni stroma–sistema immunitario, i programmi di riparazione delle ferite e le vie di rimodellamento fibrotico. Un’espressione elevata di FAP è spesso associata allo stroma tumorale desmoplastico, all’infiammazione cronica e a microambienti legati alla fibrosi, rendendola un bersaglio rilevante per lo studio della biologia dello stroma e della regolazione del microambiente in modelli di malattia umana.

Le particelle di attivazione lentivirale FAPα (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di FAP in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale FAPα (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione FAP, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di FAPα. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo FAP e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.