FAM86A CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-427731

概要

Eef2kmtはFAM86Aをコードしており、FAM86Aは翻訳因子eEF2を修飾すると報告されているタンパク質メチル基転移酵素です。これにより、リボソーム機能および翻訳伸長の翻訳後制御に関与することが示唆されます。eEF2関連タンパク質の恒常性を調節することで、FAM86Aは細胞増殖プログラム、ストレス応答、ならびに栄養・エネルギー状態の変化への適応に影響を及ぼし得る位置づけにあります。翻訳制御ネットワークの攪乱は増殖性および神経生物学的表現型と広く関連しているため、Eef2kmtはマウス系におけるプロテオスタシスやシグナル間クロストークの機構研究に有用な標的となります。

FAM86A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるEef2kmt遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Eef2kmt内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Eef2kmtのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、FAM86Aタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、FAM86Aシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Eef2kmt欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• FAM86Aの機能に不可欠なEef2kmtエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Eef2kmtゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• FAM86A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびFAM86A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Eef2kmt遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  FAM86A HDRプラスミド（m）および FAM86A HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはEef2kmtホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のEef2kmt標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。