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EXTL1慢病毒激活颗粒(h2) | sc-409470-LAC-2 | 200 µl | $455.00 |
人类EXTL1基因编码外骨疣样糖基转移酶1,这是一种与高尔基体相关的酶,参与蛋白聚糖上肝素硫酸(heparan sulfate, HS)链的生物合成与延长,从而影响细胞外基质的组成以及细胞表面共受体的功能。通过在肝素硫酸组装中的作用,EXTL1会调控依赖糖胺聚糖介导的配体分布与受体结合的关键信号网络,例如FGF、WNT和Hedgehog通路。肝素硫酸代谢的失衡(包括EXTL1活性改变)已被认为与发育过程紊乱以及涉及异常细胞通讯和基质重塑的疾病相关。对EXTL1进行基因编辑或功能扰动,有助于在人体细胞模型中开展关于糖基化依赖性信号传导、蛋白聚糖生物学以及通路特异性读出的机制研究。
EXTL1 慢病毒激活颗粒(h2)通过将完整的协同激活介导体(SAM)转录激活系统包装到可直接转导的高滴度慢病毒颗粒中,满足了这一需求,从而能够在更广泛的人类细胞类型中高效上调 EXTL1 表达。
EXTL1 慢病毒激活颗粒(h2)通过慢病毒转导递送协同激活介导体(SAM)系统的所有功能组分。该系统包含三种共同转导至靶细胞的颗粒制剂:一种编码与VP64转激活域融合的无催化活性的dCas9(D10A和N863A突变),并携带布拉西定抗性基因; 一种编码MS2-p65-HSF1融合蛋白并携带潮霉素抗性基因的制剂;以及一种编码靶标特异性20 nt sgRNA(与两个MS2 RNA适配体融合)并携带嘌呤霉素抗性基因的制剂。经过慢病毒转导和表达盒的基因组整合后,SAM组分得以稳定表达,并在EXTL1转录起始位点上游的近端启动子区域内的靶位点组装。在此处,VP64、p65和HSF1协同作用,招募内源性转录 machinery,从而驱动内源性EXTL1表达的持续上调。使用无核酸酶活性的 dCas9 可避免引入双链 DNA 断裂,并保留原生的 EXTL1 基因组位点和调控架构。
慢病毒载体具有多项实用优势:稳定的基因组整合支持细胞分裂过程中的可遗传激活;高滴度颗粒制剂免去了内部病毒生产的需要;且与原代细胞、非增殖细胞及转染抗性细胞类型的兼容性,扩大了实验的可及性。可通过嘌呤霉素、潮霉素和布拉西定进行三重抗生素筛选,以确认并富集成功的转导。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。