ESET Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401325-ACT

O SETDB1 humano codifica a ESET, uma metiltransferase de lisina de histona contendo domínio SET que deposita marcas repressivas de H3K9me3 para promover a formação de heterocromatina e o silenciamento gênico estável. A ESET atua na regulação epigenética da transcrição, na supressão de retroelementos endógenos e na manutenção da integridade do genoma por meio de interações com correpressores e complexos de remodelamento de cromatina. Ao moldar programas transcricionais específicos de linhagem, a SETDB1 influencia a pluripotência, a diferenciação e estados de cromatina associados ao ciclo celular. A atividade desregulada de SETDB1 e paisagens alteradas de metilação de H3K9 são frequentemente estudadas no contexto de reprogramação transcricional oncogênica e fenótipos de evasão imune, bem como de instabilidade mais ampla do epigenoma em modelos de doença humana.

ESET O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SETDB1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ESET O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SETDB1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SETDB1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ESET. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SETDB1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ESET no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ESET em células tumorais com expressão de SETDB1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.