ErbB3/HER3 Plasmide Double Nickase (h): sc-400146-NIC

ERBB3 codifica ErbB3/HER3, un membro della famiglia dei recettori tirosin-chinasici ERBB con un dominio chinasico intrinseco compromesso, che funziona principalmente tramite eterodimerizzazione, in particolare con ERBB2/HER2. L’attivazione ligando-dipendente da parte delle neureguline promuove la formazione del complesso recettoriale e eventi di fosforilazione che propagano la segnalazione PI3K–AKT e MAPK, coordinando proliferazione, sopravvivenza, differenziamento e le decisioni sul destino delle cellule epiteliali. ERBB3 è spesso coinvolto in reti di segnalazione oncogeniche, in cui un’alterata espressione o un “rewiring” delle vie può sostenere cambiamenti nella dipendenza dai fattori di crescita e una segnalazione adattativa. Il suo ruolo centrale nel cross-talk tra recettori lo rende un nodo ampiamente utilizzato per studiare la robustezza della segnalazione, la regolazione tramite feedback e i meccanismi di resistenza ai farmaci a livello di via.

ErbB3/HER3 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ERBB3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ERBB3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ERBB3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ERBB3 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.