ErbB3/HER3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400146-ACT

ERBB3は、主にキナーゼ活性が低下した共受容体として機能するERBB受容体型チロシンキナーゼファミリーの一員であるErbB3/HER3をコードします。リガンド（例：ニューレグリン）結合により、ErbB3はERBB2/HER2や他のERBB受容体とヘテロ二量体を形成し、PI3K–AKT、MAPK/ERKなどの増殖・生存に関わる経路を介したシグナル伝達を開始します。細胞質側テールには複数のPI3Kドッキング部位が存在し、内在的な触媒活性が限定的であるにもかかわらず、下流シグナルへ強力に結合して伝達できるようになっています。ERBB3の発現やシグナル伝達の破綻は、がん性ネットワークの再配線、転移に関連する表現型、ならびに複数の腫瘍環境における耐性機構に関与するとされています。

ErbB3/HER3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ERBB3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ErbB3/HER3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ERBB3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はERBB3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ErbB3/HER3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のERBB3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるErbB3/HER3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびERBB3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるErbB3/HER3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。