Plásmido Doble Nickase (m) EPAS-1/HIF-2 alpha: sc-420183-NIC

Epas1 codifica EPAS-1/HIF-2α, un factor de transcripción sensible al oxígeno que forma un heterodímero con ARNT para coordinar la expresión génica inducida por hipoxia. En condiciones de baja tensión de oxígeno, EPAS-1/HIF-2α se acumula y promueve programas vinculados a la angiogénesis, la eritropoyesis, el metabolismo celular y fenotipos tipo madre mediante la señalización de HIF y la interacción con las vías de VEGF, EPO y la glucólisis. En modelos murinos, la actividad de Epas1 es fundamental para el desarrollo vascular y la adaptación fisiológica a la hipoxia, con amplia relevancia para el remodelado impulsado por hipoxia en tumores, modelos de lesión isquémica y microambientes inflamatorios. La señalización desregulada de EPAS-1/HIF-2α se utiliza ampliamente como punto de partida mecanístico para estudiar la detección de oxígeno, el control transcripcional y la reprogramación metabólica.

EPAS-1/HIF-2 alpha El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Epas1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Epas1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Epas1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Epas1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.